實驗室臺式離心機常用的離心方法大致分為以下三種:
1.差速離心法。采用不同的離心速度和離心時間,使沉降速度不同的顆粒分步離心的方法,稱為差速離心。操作時,將含有兩種不同顆粒的混懸液,以常速離心,使大的顆粒下沉,將上清液傾倒于另一離心管中,再加大離心力,離心一定時間,分離小的顆粒,反復多次分離,達到分離目的。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。差速離心法的優(yōu)點是:操作簡單,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉子。
2.密度梯度離心法。該法又分為速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法。樣品在一定惰性梯度介質(zhì)中進行離心沉淀或沉降平衡,在一定離心力下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。這種離心方法的優(yōu)點是:具有很好的分辨率,分離效果好,可一次獲得較純顆粒;適用范圍廣,既能分離沉淀系數(shù)差的顆粒,又能分離有一定浮力密度的顆粒;顆粒不會積壓變形,能保持顆粒活性,并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。被離心的物質(zhì)根據(jù)其沉降系數(shù)不同進行分離,同類物質(zhì)則因分子大的沉降速度快于分子小的物質(zhì)從而得到分離。密度梯度的制備可采用梯混合器,也可將不同濃度的蔗糖溶液,小心地一層層加入離心管中,越靠管底,濃度越高,形成階梯梯度。在密度梯度離心過程中,區(qū)帶的位置和寬度隨離心時間的不同而改變。隨離心時間的加長,區(qū)帶會因顆粒擴散而越來越寬。
3.臺式高速離心機GT10-1分析性超速離心法。分析型超速離心機主要由一個橢圓形的轉子、一套真空系統(tǒng)和一套光學系統(tǒng)所組成。該轉子通過一個柔性的軸連接成一個高速的驅(qū)動裝置,此軸可使轉子在旋轉時形成自己的軸。轉子在一個冷凍的真空腔中旋轉,其容納兩個小室:分析室和配衡室。分析室的容量一般為1mL,呈扇形排列在轉子中,其工作原理與一個普通水平轉子相同。分析室有上下兩個平面的石英窗,離心機中裝有的光學系統(tǒng)可保證在整個離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì),可以通過對紫外光的吸收或折射率的不同對沉降物進行監(jiān)測。
臺式醫(yī)用離心機是離心機中zui簡單而廉價的,常用來壓緊或收集小量快速沉降的物質(zhì)(例如紅細胞)。大多數(shù)臺式醫(yī)用離心機的zui大速度不超過5000rpm,并且都在室溫中運轉,所以在操作使用中應注意以下方面:
1.將待離心的液體置于離心管中,盛有離心液的兩支離心管分別放入離心套管中(如離心液只夠盛于一支離心管中,另一支管心管中裝普通水),在托盤天平上通過向套管中加水調(diào)節(jié)兩邊重量使之達到平衡。
2.已平衡的離心管連同套管一起,對稱放入旋轉臺的兩個插孔中。蓋上蓋,打開電源開關,調(diào)節(jié)旋鈕逐步加擋到所要求的轉速,開始計算離心時間。
3.到達所需要離心時間后,再調(diào)旋鈕進行減速。待離心機自然停止轉動后取出離心管。